Retatrutid(povezava:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) je kemično sintetiziran dolgodelujoči polipeptidni agonist GLP-1R/GIPR/GCGR, ki je namenjen zdravljenju sladkorne bolezni tipa 2 pri odraslih, uravnavanju telesne teže in brezalkoholnega zamaščenega jetra/nealkoholnega steatohepatitisa. Indikacija tega izdelka za sladkorno bolezen tipa 2 pri odraslih je bila odobrena za klinično uporabo 29. avgusta 2023. Poleg tega je vloga za klinično registracijo indikacij za nealkoholna zamaščena jetra/nealkoholni steatohepatitis v fazi končnega pregleda. V svetu je v razvoju osem agonistov GLP-1R/GIPR/GCGR, od katerih je Ritin Retatrutide dosegel najhitrejši napredek in junija letos začel tretjo fazo kliničnega preskušanja. Istega meseca je Rita objavila, da so bili na letnem srečanju ADA objavljeni podatki druge faze raziskave o retatrutidu, ki kažejo, da je po 24 tednih retatrutid (1 mg, 4 mg, 8 mg ali 12 mg) dosegel glavno končno točko učinkovitosti. ocena pri debelih ali prekomerno težkih udeležencih brez sladkorne bolezni, s povprečno izgubo teže 17,5 %. Med sekundarnimi končnimi točkami je bila ob koncu 48 tednov zdravljenja dosežena povprečna izguba teže 24,2 %. Peptid smo tudi sintetizirali v laboratoriju na podlagi objavljene metode. Specifična metoda sinteze bo na kratko opisana, specifične korake pa nam lahko pošljete po e-pošti.
1. način:
Podrobni koraki za sintezo retarutida z uporabo sinteze v trdnem stanju v laboratoriju so naslednji:
Pripravite potrebne reagente in instrumente: vključno z aminokislinami, diklorometanom, kalijevim karbonatom, etoksiliranim silikagelom, acetonitrilom, piridinom, N-metilmorfolinom, virom diizopropilet klorida, trifluoroocetno kislino, DIPEA, Boc zaščitenimi aminokislinami in drugimi reagenti ter magnetnimi mešali , rotacijski uparjalniki in drugi instrumenti.
(1) Sinteza Boc zaščitenih aminokislin: zahtevane aminokisline raztopite v diklorometanu, dodajte kalijev karbonat v prahu, enakomerno premešajte, dodajte etoksiliran silikagel, nadaljujte z mešanjem in nato dodajte piridin in N-metilmorfolin, da dobite Boc zaščitene aminokisline.
(2) Sinteza v trdni fazi: skupaj zmešajte acetonitril, vir diizopropilet klorida in trifluoroocetno kislino, enakomerno premešajte, dodajte pripravljene Boc zaščitene aminokisline in nadaljujte z mešanjem, da dobite produkt sinteze v trdni fazi.
(3) Deprotekcijska skupina: raztopite sintezo trdne faze v diklorometanu, dodajte trifluoroocetno kislino, enakomerno premešajte in nato dodajte DIPEA. Nadaljujte z mešanjem, da dobite sintezo trdne faze brez zaščite.
(4) Čiščenje: sintezo trdne faze brez zaščite raztopite v vodi, naravnajte pH na okoli 9.0 z raztopino natrijevega hidroksida, nato nastavite pH na okoli 5.0 z ocetno kislino in na koncu čisti produkt oborimo z etrom.
2. način:
Podrobni koraki za sintezo retarutida s sintezo tekoče faze v laboratoriju so naslednji:
Pripravite zahtevane reagente in instrumente: vključno z argininom, glicinom, anhidridom ocetne kisline, trietilaminom, kalijevim karbonatom, diklorometanom, metanolom, piridinom, N-metilmorfolinom, anhidridom ocetne kisline, natrijevim acetatom in drugimi reagenti, kot tudi instrumente, kot so mešala, ločevalni lijaki, vakuumske črpalke, pečice in kromatografske kolone.
(1) Raztopite arginin in glicin v ustrezni količini diklorometana, dodajte ustrezno količino anhidrida ocetne kisline in trietilamina ter enakomerno premešajte pod mešalom.
(2) Raztopljeno mešanico prenesite v pečico in jo segrevajte pri 80 stopinjah C 1 uro, da se acetilirajo aminokislinski ostanki.
(3) Reagirano raztopino nevtralizirajte s kalijevim karbonatom v prahu, da nevtralizirate ocetno kislino v raztopini, da ustvarite natrijev acetat, nato pa nastali peptid ekstrahirajte z diklorometanom.
(4) Ekstrahirano peptidno raztopino sperite z metanolom in filtrirajte z vakuumsko črpalko, da dobite surovi peptid.
(5) Raztopite surovi peptid v ustrezni količini piridina in N-metilmorfolina, dodajte ustrezno količino anhidrida ocetne kisline in natrijevega acetata ter enakomerno premešajte z mešalnikom.
(5) Reagirano raztopino filtrirajte z vakuumsko črpalko, filtrsko pogačo sperite z metanolom in nato filtrirajte z vakuumsko črpalko, da dobite končni Restarutid.
3. način:
Podrobni koraki za sintezo retarutida z uporabo kemičnih metod v laboratoriju so naslednji:
Pripravite zahtevane reagente in instrumente: vključno z argininom, glicinom, anhidridom ocetne kisline, trietilaminom, kalijevim karbonatom, diklorometanom, metanolom, piridinom, N-metilmorfolinom, anhidridom ocetne kisline, natrijevim acetatom in drugimi reagenti, kot tudi instrumente, kot so mešala, ločevalni lijaki, vakuumske črpalke, pečice in kromatografske kolone.
(1) Raztopite arginin in glicin v ustrezni količini diklorometana, dodajte ustrezno količino anhidrida ocetne kisline in trietilamina ter enakomerno premešajte pod mešalom.
(2) Raztopljeno mešanico prenesite v pečico in jo segrevajte pri 80 stopinjah C 1 uro, da se acetilirajo aminokislinski ostanki.
(3) Reagirano raztopino nevtralizirajte s kalijevim karbonatom v prahu, da nevtralizirate ocetno kislino v raztopini, da ustvarite natrijev acetat, nato pa nastali peptid ekstrahirajte z diklorometanom.
(4) Ekstrahirano peptidno raztopino sperite z metanolom in filtrirajte z vakuumsko črpalko, da dobite surovi peptid.
(5) Raztopite surovi peptid v ustrezni količini piridina in N-metilmorfolina, dodajte ustrezno količino anhidrida ocetne kisline in natrijevega acetata ter enakomerno premešajte z mešalnikom.
(6) Reagirano raztopino filtrirajte z vakuumsko črpalko, filtrsko pogačo sperite z metanolom in nato filtrirajte z vakuumsko črpalko, da dobite končni Restarutid.
Za pridobitev ciljne molekule je potrebnih več reakcij organske sinteze. Poleg tega ta metoda uporablja več organskih reagentov in zapletene pogoje delovanja, zato kemična sinteza Rotarutida v laboratoriju običajno ni primerna za obsežno proizvodnjo ali industrijsko uporabo. Za obsežno proizvodnjo ali industrijsko uporabo je najpogosteje uporabljena metoda priprava Rotarutida s sinteznimi metodami, kot sta biosinteza ali sinteza tekoče faze, ki so relativno majhne v laboratorijskem obsegu, relativno enostavne za uporabo in primerne za pripravo majhnih količin izdelkov . Retarutid, pridobljen s temi metodami, je po strukturi in biološki aktivnosti podoben ali podoben retarutidu, sintetiziranem s kemičnimi metodami, vendar ima prednosti večjega izkoristka in lažje priprave. Hkrati imajo tudi boljši industrializacijski potencial in širše možnosti uporabe.
4. način:
Podrobni koraki za sintezo retarutida z uporabo bioloških metod v laboratoriju so naslednji:
Priprava potrebnih genov in reagentov: Pridobite plazmide, ki vsebujejo gen Retatrutide iz genske knjižnice, transformirajte plazmide s prejemnimi celicami (kot je Escherichia coli) in pridobite inženirske bakterije, ki vsebujejo gen Retatrutide.
(1) Gojenje inženirskih bakterij: pod ustreznimi pogoji temperature, pH in koncentracije ionov uporabite gojišče za gojenje inženirskih bakterij, ki jim omogoči razmnoževanje v velikih količinah.
(2) Ekstrakcija retarutida: Gojene inženirske bakterije se zdrobijo z drobilnikom, celični fragmenti pa se ločijo od retarutida z metodami, kot sta ultrafiltracija in sedimentacija, da dobimo surovi produkt.
(3) Čiščenje retarutida: surovi retarutid se očisti s kromatografsko tehnologijo, da se pridobi retarutid visoke čistosti.
Odkrivanje in identifikacija Rotarutida: Uporabite tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti, masno spektrometrijo, jedrsko magnetno resonanco in druge tehnike za odkrivanje in identifikacijo strukture očiščenega Rotarutida.
Enačba kemijske reakcije za biološko sintezo retarutida v laboratoriju vključuje predvsem kemične reakcije med postopkom izražanja genov, vključno z dvema korakoma: transkripcijo in translacijo.
Transkripcija: dvoverižna DNA se odpre, pri čemer se ena veriga uporablja kot predloga za sintezo verig RNA, kar zahteva sodelovanje RNA polimeraze. Enačba reakcije je naslednja:
DNA dvoverižna: DNApol → mRNA+DNApol
Prevod: Ribosomi se vežejo na mRNA, da sintetizirajo peptidne verige, proces, ki zahteva sodelovanje aminokislin in energije. Enačba reakcije je naslednja:
Ribosom+mRNA → Peptidna veriga+GDP+Pi+H2O
Peptidna veriga+ATP → Peptidna veriga+AMP+PPi
Med njimi DNApol predstavlja DNA polimerazo; MRNA predstavlja messenger RNA; Ribosomi predstavljajo ribosome; Peptidne verige predstavljajo polipeptidne verige; BDP predstavlja gvanozin difosfat; Pi predstavlja anorgansko fosforno kislino; H2O predstavlja vodo; ATP predstavlja adenozin trifosfat; AMP predstavlja adenozin monofosfat; PPi predstavlja anorganski pirofosfat. Te reakcije ustvarjajo peptidne verige, potrebne za sintezo retarutida, ki se nato v kasnejših fazah obdelajo in modificirajo, da se pridobi retarutid.
Zgoraj so običajne metode za sintezo Rotarutida v laboratoriju, vsaka z različnimi prednostmi, slabostmi in obsegom uporabe. Laboratorij običajno uporablja metode sinteze tekoče faze in sinteze trdne faze za proizvodnjo v majhnem obsegu za raziskovalno in eksperimentalno uporabo; Po drugi strani pa industrijska proizvodnja uporablja kombinacijo biosinteze in proizvodnje tekoče/trdne faze za obsežno proizvodnjo, da zadosti povpraševanju na trgu. Opozoriti je treba, da te metode zahtevajo strogo optimizacijo pogojev in nadzor procesa, da se zagotovi kakovost in čistost končnega izdelka.