Proteinaza K v prahu CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. je eden najbolj izkušenih proizvajalcev in dobaviteljev proteinaze k v prahu cas 39450-01-6 na Kitajskem. Dobrodošli v veleprodaji visokokakovostnega proteinaze k v prahu cas 39450-01-6 za prodajo tukaj iz naše tovarne. Na voljo sta dobra storitev in razumna cena.

Proteinaza K v prahuje zelo učinkovita, ne{0}}specifična serinska proteaza, ki se pogosto uporablja v molekularni biologiji in biokemiji, predvsem za razgradnjo beljakovin in odstranjevanje kontaminantnih beljakovin iz pripravkov nukleinske kisline. Pridobiva se iz glive Engyodontium album (prej Tritirachium album) in ohranja svojo aktivnost v širokem razponu temperatur (20-60 stopinj) in pH (4-12), tudi če je inkubirana v raztopini, ki vsebuje SDS (0,5-1 %) ali sečnino (4M) pod denaturacijskimi pogoji.

Encim učinkovito razgradi široko paleto beljakovin, vključno z RNazo in DNazo, s cepitvijo peptidnih vezi (prednostno hidrolizira karboksilni konec alifatskih/aromatskih aminokislin), zato se uporablja za odstranjevanje nukleaze pri ekstrakciji DNA/RNA, da se zagotovi celovitost nukleinske kisline. Poleg tega se običajno uporablja pri prebavi tkiv (npr. parafin-vdelani vzorci), celični lizi in študijah proteomike.

Proteinaza K v prahu je običajno na voljo v liofilizirani obliki, ki je zelo stabilna (-20 stopinj za dolgoročno shranjevanje) in jo je treba pred uporabo raztopiti v pufru (npr. Tris-HCl, EDTA). Njegova aktivnost je odvisna od Ca²⁺, vendar kelatna sredstva, kot je EDTA, le delno zavirajo aktivnost encimov. Med rokovanjem se je treba izogniti samorazgradnji in priporočljiva je toplotna inaktivacija pri 65 stopinjah. Zaradi njegove močne sposobnosti hidrolizacije beljakovin je potrebna skrbna zaščita, da se prepreči stik s kožo ali sluznico.

Proteinaza k v prahu, znana tudi kot Proteinaza K ali EC 3.4.21.14, je serinska proteaza, izolirana in prečiščena iz Tritirachium album Limber. Od prve izolacije Wolfganga Ebelinga et al. leta 1974 se je proteinaza K široko uporabljala v biokemiji, molekularni biologiji, medicini in industriji zaradi svoje visoke aktivnosti in široke specifičnosti substrata.

V procesu ekstrakcije DNK in RNK je glavna funkcija proteinaze K razgradnja proteinov, vezanih na nukleinske kisline, kar omogoča, da sta DNK ali RNK prosti v raztopini za kasnejšo ekstrakcijo in čiščenje. Zaradi svoje stabilnosti in visoke aktivnosti v denaturacijskih sredstvih, kot sta sečnina in SDS, se proteinaza K običajno uporablja za izolacijo plazmidov ali genomske DNA in RNA.

proteinaza K lahko zavre aktivnost RNAse in zaščiti RNA pred razgradnjo.

1. Ekstrakcija DNA in RNA

 

Ekstrakcija DNK: Proteaza K lahko hidrolizira histone, ki se vežejo na DNK, kar omogoči disociacijo DNK v raztopini. Nato so bile nečistoče odstranjene z različnimi metodami, kot je ekstrakcija s fenolom in kloroformom, obarjanje z etanolom itd., in zbrana je bila očiščena DNA.
Ekstrakcija RNA: Med postopkom ekstrakcije RNA so encimi RNA običajno prisotni v okolju, sam vzorčni sistem pa lahko vsebuje tudi encime RNA, zaradi česar je RNA zelo dovzetna za razgradnjo. Dodajanje majhne količine

2. In situ hibridizacijska tehnologija

 

V hibridizacijski tehnologiji in situ se proteinaza K običajno uporablja za predhibridizacijsko obdelavo za prebavo proteinov, ki obdajajo ciljno DNA, poveča možnost vezave sonde na ciljno nukleinsko kislino in okrepi hibridizacijski signal. Vendar je treba opozoriti, da kadar je koncentracija proteinaze K previsoka, je čas prebave predolg ali je inkubacijska temperatura previsoka, lahko povzroči poškodbe celične strukture, kar povzroči odpadanje delov tkiva in izginotje celičnih jeder, kar vpliva na rezultate hibridizacije. Zato je v praktičnih aplikacijah potrebno strogo nadzorovati koncentracijo in čas zdravljenja proteinaze K.

3. Inaktivacija in dezinfekcija virusa

 

Proteazo K lahko zaradi močne proteolitične aktivnosti uporabimo za inaktivacijo in dezinfekcijo virusa. Raziskave so pokazale, da lahko čiščenje čiste vode in gospodinjskih odpadnih voda z določeno koncentracijo proteinaze K učinkovito inaktivira viruse. Proteaza K kot razkužilo, ki inaktivira viruse, lahko zmanjša potencialno škodo, ki jo običajna oksidativna kemična razkužila povzročijo človeškemu telesu, njena proizvodnja in transport pa sta varna brez nepopravljivega onesnaženja okolja.

4. Western blot in pulzna elektroforeza

 

Proteazo K so pogosto uporabljali tudi pri pripravi kromosomske DNA za pulzno elektroforezo, Western blot in druge poskuse. V poskusih Western blot lahko proteinazo K uporabimo za odstranitev ne-specifičnih proteinov iz vzorca, s čimer izboljšamo specifičnost in občutljivost blota. Pri poskusih pulzne elektroforeze lahko proteinaza K razgradi beljakovinske nečistoče v vzorcih DNK in izboljša učinkovitost elektroforeze.

5. Detekcija in identifikacija beljakovin

 

Proteinaza k v prahuse lahko uporablja tudi za detekcijo in identifikacijo določenih proteinov. Na primer, v študiji transmisivne spongiformne encefalopatije (TSE) lahko proteinazo K uporabimo za prebavo beljakovin v vzorcih možganskega tkiva in za identifikacijo prisotnosti prionskih proteinov z odkrivanjem odpornosti patogenih prionov na proteinazo K. Poleg tega lahko proteinazo K uporabimo tudi za poskuse, kot je določanje lokalizacije encimov na celičnih membranah in odstranjevanje kationskih proteinov, vezanih na endotoksine (kot je npr. lizocim in ribonukleaza A).

1. Medicinsko področje

 

Klinična uporaba: Proteaza K ima določeno medicinsko vrednost v medicini. Na primer, zdravljenje prebavne motnje z želodčno proteazo, zdravljenje bronhitisa s kislo proteazo, zdravljenje vaskulitisa z elastazo itd. Poleg tega se tripsin, kimotripsin itd. pogosto uporabljajo tudi za čiščenje kirurških gnojnih ran in zdravljenje plevralnih seroznih adhezij.
Odkrivanje in diagnoza virusov: Proteaza K ima potencialne aplikacije tudi pri odkrivanju in diagnosticiranju virusov. Z razgradnjo beljakovin v vzorcu virusa in izpostavitvijo nukleinske kisline virusa zagotavlja udobje za kasnejše testiranje nukleinske kisline.

2. Industrijski sektor

 

Usnjarska industrija: Proteaza K se uporablja v usnjarski industriji za odstranjevanje dlak in mehčanje, kar lahko prihrani čas in izboljša higienske pogoje dela.
Tekstilna industrija: Protease K se lahko uporablja v tekstilni industriji, kot je degumiranje svile.
Živilska industrija: Proteazo K se lahko uporablja v prehrambeni industriji za mehčanje mesa, bistrenje alkohola itd.
Detergent: detergent za pranje perila z dodanim encimom je nov izdelek v detergentih. Detergent za pranje perila, ki vsebuje alkalno proteazo, lahko odstrani madeže krvi in ​​beljakovinsko umazanijo z oblačil. Toda pri uporabi bodite previdni, da se ne dotikate kože, da ne poškodujete beljakovin na površini kože in ne povzročite alergijskih reakcij, kot sta izpuščaj in ekcem.

Strukturne značilnosti

 

Molekulska masa proteinaze K je približno 28900 daltonov (28,9 kDa), literatura pa poroča tudi o 29,3 kDa. Njegovo aminokislinsko zaporedje in -tridimenzionalna prostorska struktura sta zelo podobni subtilizinu iz družine serinskih proteaz, vendar ima tudi nekaj edinstvenih značilnosti.

Struktura disulfidne vezi: Molekule proteaze K vsebujejo disulfidne vezi, ki povečajo njihovo stabilnost in jim omogočajo ohranjanje aktivnosti v širokem območju pH in visokih temperatur.
Vezavna mesta Ca ²⁺:Proteinaza k v prahuvsebuje dve Ca²⁺ vezavni mesti, ki sta, čeprav daleč od aktivnega središča, ključni za vzdrževanje katalitične aktivnosti encima. Odstranitev Ca ² ⁺ bo povzročila izgubo približno 80 % aktivnosti proteaze K, ponovna uvedba Ca ² ⁺ pa lahko le delno obnovi njeno aktivnost.
Katalitska triada: Proteaza K ima katalitično triado Asp-His69-Ser224, ki je ključna struktura za njeno hidrolitično aktivnost.

Mehanizem delovanja

 

Proteaza K lahko prednostno hidrolizira estrske in peptidne vezi, ki mejijo na C-konec hidrofobnih aminokislin, aminokislin, ki vsebujejo žveplo-, in aromatskih aminokislin ter hidrolizira proteine ​​v kratke peptide. Njegov mehanizem delovanja vključuje predvsem naslednje korake:

Vezava encimskega substrata: Ko se proteaza K zmeša s substratom, se substrat veže na aktivno mesto encima in tvori kompleks encimskega substrata.
Katalitska reakcija: Pod delovanjem aktivnega mesta se peptidna vez substrata hidrolizira, da nastane produkt, ločen od encima.
Zaradi močnega razgradnega učinka proteaze K je ključni reagent v različnih biokemičnih reakcijah, zlasti v procesih ekstrakcije DNK in RNK. Proteaza K lahko učinkovito razgradi beljakovine, vezane na nukleinske kisline, sprosti nukleinske kisline in zavira aktivnost nukleaz, kar zmanjša razgradnjo nukleinskih kislin med ekstrakcijo.

Proteinaza k v prahu, kot zelo aktivna in substratno specifična serinska proteaza, ima širok spekter uporabe v biokemiji, molekularni biologiji, medicini in industriji. Lahko razgradi beljakovine, ki se vežejo na nukleinske kisline, in sprosti nukleinske kisline; Povečajte možnost, da se sonde vežejo na ciljne nukleinske kisline v tehnologiji in situ hibridizacije; Uporablja se za inaktivacijo virusa in dezinfekcijo; Odstranite beljakovinske nečistoče v poskusih Western blot in pulzne elektroforeze; Ima zdravilno vrednost na področju medicine; Uporablja se na industrijskih področjih, kot so predelava usnja, tekstilna industrija, živilska industrija in proizvodnja detergentov. Vendar pa je treba pri uporabi proteinaze K paziti na način shranjevanja in pogoje uporabe, da zagotovimo njeno stabilnost in aktivnost.

Proteinaza K je serinska proteaza širokega-spektra, ki se pogosto uporablja v molekularni biologiji, biokemiji in medicinskih raziskavah zaradi svojih edinstvenih encimskih lastnosti in stabilnosti. Kot zmrznjeno{2}}posušena praškasta oblika ima proteinaza K v prahu ključno vlogo pri poskusih, kot so ekstrakcija nukleinske kisline, prebava beljakovin in homogenizacija tkiva. Vendar je uporaba katerega koli biološkega reagenta povezana s potencialnimi tveganji, njegovi neželeni učinki pa lahko vključujejo zdravje izvajalcev in varnost eksperimentalnega okolja.

Priljubljena oznake: proteinaza k v prahu cas 39450-01-6, dobavitelji, proizvajalci, tovarna, veleprodaja, nakup, cena, v razsutem stanju, za prodajo