Liraglutid v prahu CAS 204656-20-2

Liraglutid v prahu, Molekularna formula C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, molekularna masa 1209.40. Gre za umetno sintetiziran aciliran človeški glukagon kot peptid-1 (GLP-1) analog z več kot 97% podobnostjo zaporedja v primerjavi z naravnim GLP-1. Lahko raztopimo v vodi, etanolu in propilen glikolu. 34. položaj lizina naravne molekule GLP-1 nadomešča arginin, ki ne le ohrani in podaljša čas vezave med acilacijsko produkti in beljakovinami, ampak tudi znatno premaga pomanjkljivost lahke razgradnje GLP. V normalnih pogojih skladiščenja ima dobro stabilnost, njegova vodna raztopina pa lahko vsaj 2 leti vzdržuje fizično in kemično stabilnost.

Genetska strupenost: rezultati testa Ames zaLiraglutid v prahu, kromosomski aberacijski test za človeške periferne krvne limfocite in test mikronukleusa podgane sta bila negativna.

Reproduktivna strupenost:

1. Moške podgane so podkožno injicirali z 0,1, 0,25 in 1,0 mg/kg/d liraglutida 4 tedne pred parjenjem in med parjenjem. Pri odmerku 1,0 mg/kg/d na plodnost moških živali ni bila neposredno prizadeti. Glede na plazemske AUC izračune je bila sistemska izpostavljenost, ki jo je ustvaril ta odmerek, približno 11 -krat večja od človeške izpostavljenosti pri največjem priporočenem človeškem odmerku (MRHD). Podkožna injekcija 1,0 mg/kg v ženske podgane je povzročila povečano zgodnjo embrionalno smrt, vidno povečanje telesne mase in zmanjšan vnos hrane.

2. Od 2 tedna pred parjenjem do 17. dneva nosečnosti pri ženskih podganah so dajali podkožne injekcije 0,1, 0,25 in 1,0 mg/kg/d liraglutida. Glede na plazemske izračune AUC je bila sistemska izpostavljenost, ki jo ustvarjajo ti trije odmerki, približno 0,8, 3 in 11 -krat večja od človeške izpostavljenosti pod MRHD. V skupini odmerka 1 mg/kg/d se je število zgodnjih embrionalnih smrti rahlo povečalo. Pri vseh odmerkih so opazili nepravilnosti ploda, ledvične in žilne variacije, nepravilno okostiljenje lobanje in popolno stanje prekomerne okostenine. Pri odmerku 1,0 mg/kg/d so opazili pikasta jetra in rahlo zasukanje rebra. Incidenca malformacij ploda, ki presega isto obdobje in zgodovinski nadzor, je: Orofaringealne malformacije in/ali stenoza pri odprtju grla pri odmerku 01 mg/kg/d ter popkovnične napake v odmerkih 0,1 in 0,25 mg/kg/d.

Od 6. do 18. dne nosečnosti so bili kunci subkutano injicirani z liraglutidom v koncentracijah 0,01, 0,025 in 0,05 mg/kg/d. Glede na plazemske izračune AUC je bila sistemska izpostavljenost nosečih zajcev nižja kot pri ljudeh med MRHD. Pri vseh odmerkih se je teža ploda zmanjšala in splošna incidenca hudih nepravilnosti ploda se je povečala na način, odvisen od odmerka. Pri odmerkih 0,01 mg/kg/d (ledvice, rame in vranice), večji ali enaki 0,01 mg/kg/d (oči in sprednje noge), 0,025 mg/kg/d (možgani, rep in vretenca, velike krvne žile in srca), večje od 0,025 m, večje od 0,025 m, ali pa 0,025 m, večje od 0,025 m. 0,05 mg/kg/d (parietalna kost in velike krvne žile) je pojavnost malformacij presegla pojavnost sodobnih in zgodovinskih kontrol. Nepravilno okostenje in/ali skeletne nepravilnosti najdemo v lobanji in ovratnici, vretencih in rebrih, prsnici, medenici, kokciksu ter ramenih in vranici; Vidno je tudi rahlo odvisno od odmerka skeletne variacije. Visceralne nepravilnosti najdemo v krvnih žilah, pljučih, jetrih in požiralniku. Vse skupine zdravljenja so pokazale dvojne režnja ali bifurkacije žolčnika, vendar v kontrolni skupini niso opazili podobne situacije.

4. V obdobju od 6. dneva nosečnosti do odstavljanja ali prenehanja dojenja 24. dan so bile podgane subkutano injicirane z 0,1, 0,25 in 1,0 mg/kg/d liraglutida. Glede na plazemske izračune AUC je bila sistemska izpostavljenost približno 0,8, 3 in 11 -krat večja od človeške izpostavljenosti med MRHD. Obdobje dostave večine živali v skupini za zdravljenje je bilo nekoliko zavlečeno. Povprečna teža novorojenčkov v skupini za zdravljenje je bila nižja kot v kontrolni skupini. Ženske podgane v 1,0 mg/kg/d odmerek so pokazale izgubo krvi in ​​vedenje med dostavo. Povprečna telesna teža potomcev F2 v skupini za zdravljenje od rojstva do 14. dne po rojstvu je bila nižja kot pri kontrolni skupini, vendar razlike med skupinami niso dosegle statističnega pomena.

Liraglutid v prahuje umetno sintetiziran aciliran človeški glukagon kot peptid-1 (GLP-1) analog z več kot 97% podobnostjo zaporedja v primerjavi z naravnim GLP-1. Molekularna struktura liraglutida vključuje naslednje glavne značilnosti: 34. položaj lizina naravne molekule GLP-1 nadomešča arginin, ki ne le ohrani in podaljša čas vezave med acilacijskimi produkti in beljakovinami, ampak tudi znatno premaga pomanjkljivost lahke razgradnje GLP; 26. lizin je bila dodana dodatna stranska veriga maščobnih kislin, ki pomaga podaljšati razpolovno dobo acilacijskih izdelkov in vivo. Te edinstvene molekularne spremembe so naredile delilaglutid izjemne učinke pri kliničnem zdravljenju, zlasti pri sladkorni bolezni in izgubi teže.

Kemične metode za sintezo liraglutida vključujejo predvsem naslednje korake:

1. Sinteza fragmenta

Najprej razdelite celoten liraglutid na več segmentov, ki jih lahko na splošno razdelimo na pet segmentov: 1. do 4. aminokisline, 5. do 10. aminokisline, 11. do 16. aminokisline, 17. do 24. aminokisline in 25. do 31 aminokisline. Vsak fragment se sintetizira ločeno, kar lahko zmanjša težave in stroške sinteze peptidov in izboljša učinkovitost sinteze.

Za sintezo vsakega fragmenta se običajno uporabljajo metode sinteze v trdni fazi ali tekočinski fazi. Metoda sinteze v trdni fazi vključuje povezovanje karboksilnih skupin aminokislin na smolo, nato zaporedno dodajanje aminokislin v smolo v zaporedju in na koncu odrezati peptide iz smole. Metoda sinteze tekočine faze vključuje raztapljanje vseh aminokislin v organskem topilu in jih nato kondenzira v zaporedju, da tvori fragmente peptidov.

2. Reakcija sklopke

Izvedite reakcijo sklopke na 5 fragmentih peptidov, sintetiziranih v koraku 1, da tvori celoten liraglutid. Reakcija sklopke se lahko izvede z uporabo kemičnih ali bioloških sredstev za spajanje, posebno metodo pa lahko izberete glede na dejanske potrebe.

V reakciji sklopke je treba amino skupino vsakega fragmenta priključiti s karboksilno skupino naslednjega fragmenta. Da bi to dosegli, je običajno treba uporabiti kondenzacijska sredstva, kot sta DIC ali BOP. Ta kondenzacijska sredstva lahko spodbujajo reakcijo med amino in karboksilnimi skupinami, ki tvorijo peptidne vezi. V reakciji spajanja je treba pozornost nameniti tudi nadzoru reakcijskih pogojev, kot so temperatura, pH vrednost in reakcijski čas, da se zagotovi nemoten napredek reakcije.

3. Čiščenje in identifikacija

Sintetizirani liraglutid je treba očistiti in prepoznati, da se zagotovi čistost in kakovost izdelka. Čiščenje običajno izvedemo po metodah, kot sta visokozmogljiva tekoča kromatografija (HPLC) ali elektroforeza, čemur sledi identifikacija z masno spektrometrijo, jedrsko magnetno resonanco in druge metode. S temi sredstvi je mogoče zagotoviti, da sta molekulska teža in zaporedje sintetiziranega izdelka skladna s pričakovanji in ni nečistoč ali stranskih ostankov.

4. Druge spremembe

Poleg zgornjih korakov so potrebne včasih druge spremembe, na primer dodajanje ali odstranjevanje zaščitnih skupin. Ti koraki so tudi bistveni, saj lahko zaščitijo aktivne skupine v peptidih pred uničenjem ali se pojavijo stranske reakcije, kar izboljšuje kakovost in donos sintetiziranegaLiraglutid v prahu.

Zgoraj so glavne kemijske metode za sintezo liraglutida, seveda pa je treba pri praktičnem delovanju opaziti nekaj podrobnosti in tehnike. Na primer, izbira ustreznega sistema topila, nadzor temperature in pH ter uporaba ustreznih katalizatorjev lahko vpliva na učinkovitost sinteze in kakovost izdelka. Zato je treba pri praktičnem delovanju prilagoditi in optimizacije opraviti v skladu s posebnimi okoliščinami.

Liraglutid (dolgo delujoč agonist receptorjev GLP-1) ima pomembno vlogo pri zdravljenju sladkorne bolezni. Da bi zagotovili njegovo kakovostno obvladljivost, je treba vzpostaviti znanstvene in stroge analitične metode in izvajati sistematično potrjevanje, da se zagotovi zanesljivost teh metod. Naslednja analiza je izvedena iz treh vidikov: veljavne postavke, metode validacije in ključne kontrolne točke.

Temeljni preverjalni elementi in tehnične zahteve

Specifičnost

Cilj: Dokazati, da lahko metoda razlikuje liraglutid od nečistoč, degradacijskih produktov in pomožnih snovi.

Strategija izvajanja:

Kromatografija: uporabite HPLC-UV ali UPLC-MS. S testi prisilne razgradnje (kot so visoka temperatura, izpostavljenost svetlobi, hidroliza kisline baze), ustvarijo produkte razgradnje in preverite stopnjo ločevanja glavnega vrha in vrhov nečistoče (večji ali enaki 1,5). Na primer, v študiji mišjega modela APOE-/-, ko se liraglutid oksidira, je treba s kromatografsko analizo potrditi produkte razgradnje (kot so adukte mravljine kisline), da se zagotovi ločitveni učinek degradacijskih produktov z glavnega vrha.

Spektroskopija: Za primerjavo UV spektrov glavnega vrha in nečistoč uporabite detektor PDA ter potrdite čistost vrhov.

Prazen nadzor: Preverite odsotnost lažno pozitivnih signalov z vzorci brez liraglutida (na primer rešitve za pomoč).

 

Natančnost

Cilj: Zagotoviti, da so izmerjeni rezultati blizu resnične vrednosti in se stopnja obnovitve nadzira v 98% - 102%.

Strategija izvajanja:

Standardni test obnovitve dodajanja: dodajte znano količino referenčne snovi v vzorec z znano vsebnostjo liraglutida in izmerite stopnjo okrevanja. Na primer, pri analizi formulacije dodajte 0,5 mg/ml, 1,0 mg/ml in 1,5 mg/ml liraglutida na prazno raztopino pomožnega snovi, vsako koncentracijo ponovite 3 -krat in izračunajte povprečno hitrost okrevanja.

Primerjalna metoda: primerjajte s klasičnimi metodami (na primer titracijo) ali preverjenimi metodami (na primer metode farmakopeje), odstopanje rezultatov pa mora biti manjše ali enako 2%.

 

Natančnost

Cilj: Oceniti stopnjo bližine večkratnih rezultatov merjenja, pri čemer je RSD manjši ali enak 2%.

Strategija izvajanja:

Ponovitev: izvedite 6 zaporednih meritev istega vzorca po istem analitiku, istem instrumentu in isti seriji vzorcev in izračunajte RSD.

Vmesna natančnost: RSD izračunajte z določitvijo iste serije vzorcev s strani različnih analitikov, različnih instrumentov in različnih datumov. Na primer, pri določanju vsebnosti liraglutida mora biti RSD ponovljivost manjša ali enaka 1,5%, vmesna natančnost RSD pa manjša ali enaka 2,0%.

Obnovljivost: Preverjanje sodelovanja z več laboratoriji (na primer standardne metode farmakopeje) bi moral RSD upoštevati načela smernic.

 

Omejitev zaznavanja in omejitev količinske določitve

Cilj: določiti minimalno koncentracijo, ki jo lahko metoda zazna in količinsko določi liraglutid.

Strategija izvajanja:

Metoda razmerja med signalom in šumom: določite LOD z razmerjem med signalom in šumom 3: 1 in določite LOQ z 10: 1 razmerjem signala in šuma. Na primer, pri metodi HPLC-UV je LOD liraglutida lahko le 0,01 ug/ml, LOQ pa 0,05 ug/ml.

Standardna metoda krivulje: Izračunajte LOD in LOQ z odzivnimi signali standardnih snovi z nizko koncentracijo (na primer 0,1 ug/ml - 1 ug/ml).

 

Linearnost

Cilj: Dokazati, da je odzivni signal sorazmeren koncentraciji, pri čemer je R² večji ali enak 0,999.

Strategija izvajanja:

Preskus koncentracije gradienta: pripravite 5-7 koncentracijske gradiente (na primer 0,1 mg/ml - 2.0 mg/ml) standardnih raztopin, izmerite vrhovno območje ali vrednost odziva in narišite standardno krivuljo.

Preostala analiza: Preverite, ali so ostanki naključno razporejeni in ni sistematičnega odstopanja.

 

Domet

Cilj: določiti uporabno območje koncentracije metode, običajno 120% LOQ do zgornje meje linearnosti.

Strategija izvajanja:

Določitev vsebine: Obseg je nastavljen na 80% - 120% označene zneske. Na primer, območje določanja vsebine formulacije liraglutida mora biti 0,4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Nadzor nečistočev: V skladu s smernico ICH Q3D določite mejni razpon nečistoč (npr. Enojna nečistoča, manjša ali enaka 0,5%, skupna nečistoča manjša ali enaka 2,0%).

Validacijski dokumenti in upravljanje podatkov

01

Načrt za preverjanje in poročilo

Jasno določite veljavne postavke, metode, standarde sprejemanja in nenormalne postopke ravnanja. Na primer, če natančnost RSD presega mejo, je treba raziskati napake v instrumentu ali operativne napake.

Zabeležite izvirne podatke (kot so kromatogrami, standardne krivulje, tabele za izračun stopnje obnovitve), da zagotovite sledljivost.

02

Razvoj metode indikacije stabilnosti

Za obvezne preskuse razgradnje mora pokriti oksidacijo, izpostavljenost svetlobi, hidrolizo itd., Da simulirajo dejanske pogoje skladiščenja. Na primer, liraglutid, nameščen na 60 stopinj 48 ur, mora biti stopnja razgradnje večja od ali enaka 10%, da se preveri sposobnost metode za odkrivanje produktov razgradnje.

03

Regulativna skladnost

Sledite ICH Q2 (R2), USP<1225>in kitajske smernice za GMP, da zagotovijo, da predmeti za potrjevanje zajemajo kazalnike jedra, kot sta specifičnost in natančnost.

Za analizo elementarnih nečistoč bi moral biti v skladu z ICH Q3D in USP<233>Zahteve, ki nadzorujejo meje elementov 1 razreda, kot so, CD in PB.

Priljubljena oznake: Liraglutide Powder CAS 204656-20-2, dobavitelji, proizvajalci, tovarna, veleprodajna, nakup, cena, razsuti