Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. je eden najbolj izkušenih proizvajalcev in dobaviteljev peptida 3xflag cas 402750-12-3 na Kitajskem. Dobrodošli v veleprodajni visokokakovostni visokokakovostni 3xflag peptid cas 402750-12-3, ki je naprodaj tukaj iz naše tovarne. Na voljo sta dobra storitev in razumna cena.
3XFLAG peptidje pomembno zaporedje peptidnih markerjev, ki se pogosto uporablja v procesih izražanja beljakovin in čiščenja v biomedicinskih raziskavah. Molekulska formula C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Sestavljeno iz 23 aminokislin, njegovo zaporedje vsebuje tri ponavljajoče se motive Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp, ki mu dajejo posebne strukturne značilnosti.
Ima dobro topnost v posebnih topilih. Na primer, v DMSO je njegova topnost visoka, zaradi česar je primeren za operacije in poskuse v raztopini. Poleg tega lahko z blagim segrevanjem doseže tudi dober učinek raztapljanja v vodi. Ima tudi nekaj posebnih lastnosti. Na primer, ima dobro antigenost in reaktivnost ter se lahko veže na specifična protitelesa proti FLAG. Zaradi te sposobnosti vezave je široko uporaben v poskusih, kot je imunoprecipitacija. S kompetitivno vezavo na protitelesa Anti FLAG se lahko FLAG fuzijski izražen protein, ki se veže na protitelesa Anti FLAG, eluira med imunoprecipitacijo, s čimer se doseže lokalizacija, odkrivanje in čiščenje ciljnega proteina.
|
Zamaški in zamaški za steklenice po meri:
|
|
|
Kemijska formula |
C120H169N31O49S |
|
Natančna masa |
2860 |
|
Molekulska teža |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Elementna analiza |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3XFLAG peptidje oznaka, ki se uporablja pri raziskavah beljakovin in je sestavljena iz 8 aminokislin z zaporedjem DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Njegova glavna funkcija je služiti kot marker za izražanje in čiščenje beljakovin, kar zagotavlja priročno in učinkovito sredstvo pri raziskavah.
1. Čiščenje afinitete:
Uporablja se lahko kot oznaka za čiščenje beljakovin in zaradi njegove visoke afinitete s protitelesi proti FLAG je mogoče zlahka očistiti ciljni protein. Običajno se ciljni protein sotransfektira v celice z ekspresijskim vektorjem, ki vsebuje 3X FLAG PEPTIDE, in nato očisti z afiniteto z uporabo protiteles proti FLAG, da se hitro in učinkovito pridobi ciljni protein visoke čistosti.
2. Imunološko testiranje:
Zaradi visoke imunogenosti se lahko uporablja za odkrivanje ekspresije in lokalizacije beljakovin. Z uporabo specifičnih protiteles proti FLAG lahko izvedemo eksperimentalne tehnike, kot sta imunobloting in imunofluorescenčno barvanje, da hitro in natančno zaznamo raven izražanja in porazdelitev ciljnih proteinov.
3. Filtriranje klonov:
Uporablja se lahko tudi za udobje presejanja proteinskih klonov. V procesu gradnje proteinskih ekspresijskih vektorjev lahko povezovanje genskega zaporedja ciljnega proteina z zaporedjem 3XFLAG olajša presejanje pozitivnih klonov s ciljnim proteinom z imunsko detekcijo in drugimi metodami, s čimer se pospeši proces raziskav delovanja proteina.
4. Imunoprecipitacija:
Uporablja se lahko tudi za poskuse imunoprecipitacije beljakovin. Z vezavo proteinov, ki vsebujejo oznake 3X FLAG PEPTIDE, na protitelesa proti FLAG in nato z uporabo adsorpcijskih materialov, kot so protein A/G agaroza ali magnetne kroglice, lahko ciljni protein in njegove medsebojno delujoče partnerje selektivno oborimo iz celičnih izvlečkov, da preučimo mrežo interakcij proteinov.
5. Preverjanje zdravil:
Uporablja se lahko tudi pri presejalnih raziskavah zdravil. S kombiniranjem oznake 3X FLAG PEPTIDE z beljakovino, ki nas zanima, je mogoče doseči visoko-presejanje beljakovine. To presejalno metodo je mogoče uporabiti za odkrivanje novih tarč zdravil, ocenjevanje interakcij med beljakovinami zdravil in tako naprej.
6. Raziskave delovanja beljakovin:
Uvedba oznak ne vpliva bistveno na naravno strukturo in delovanje proteinov, zato se lahko uporablja za preučevanje bioloških funkcij, podcelične lokalizacije, interakcij in signalne transdukcije proteinov. Z uvedbo oznake 3X FLAG PEPTIDE je-mogoče izvajati poglobljene raziskave bioloških značilnosti beljakovin, ki pomagajo razkriti njihove mehanizme delovanja v celični biologiji in fiziologiji.
3XFLAG peptidje peptid, ki vsebuje 8 aminokislin, z zaporedjem DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Običajno se uporablja kot beljakovinska oznaka za priročno čiščenje, odkrivanje in raziskovanje ciljnih beljakovin. V procesu biosinteze ga lahko pripravimo s kemično sintezo ali metodami genskega inženiringa. Sledijo podrobni koraki metod genskega inženiringa:
1. Oblikujte in sintetizirajte gene:
Najprej je treba oblikovati umetni gen, ki vsebuje zaporedje 3X FLAG PEPTIDE. Ta gen mora vsebovati zaporedje 3X FLAG PEPTIDE, kot tudi ustrezne promotorje, terminatorje in selekcijske markerje (kot so geni za toleranco na antibiotike). Zasnova genov mora upoštevati značilnosti in potrebe izražanja ciljnega gostitelja.
2. Kloniranje genov:
Nato bodo oblikovani umetni geni klonirani v ustrezne ekspresijske vektorje. Pogosto uporabljeni vektorji vključujejo plazmide, virusne vektorje itd. Postopek kloniranja običajno vključuje naslednje korake:
-PCR pomnoževanje: uporaba verižne reakcije s polimerazo (PCR) za pomnoževanje ciljnega genskega zaporedja iz vzorčne DNK.
-Prebava in povezava: produkti PCR se razgradijo z ekspresijskimi vektorji z uporabo restrikcijskih endonukleaz in se nato povežejo z ligazami DNA.
-Transformacija: Preoblikovanje povezanega ekspresijskega vektorja v bakterijske gostitelje, kot je Escherichia coli, da se tvori rekombinantni plazmid.
-Identifikacija: rekombinantne plazmide smo identificirali s PCR, encimsko razgradnjo, sekvenciranjem DNA in drugimi metodami za potrditev, da je bil ciljni gen uspešno kloniran v vektor.
3. Ekspresijski ciljni protein:
Transfektirajte konstruirani ekspresijski vektor v ciljne gostiteljske celice, kot so celice sesalcev, celice kvasovk, celice žuželk itd. Znotraj celic se ekspresijski vektor prepiše v mRNA in nato prevede v proteine. 3X FLAG PEPTIDE bo izražen skupaj s ciljnim proteinom kot proteinska oznaka.
4. Ekstrakcija beljakovin:
Zberite transficirane celice in izvedite celično fragmentacijo, centrifugiranje in druge obdelave, da dobite celoten ekstrakt beljakovin.
5. Prečiščene beljakovine:
Z uporabo tehnik afinitetnega čiščenja, kot sta imunoprecipitacija in afinitetna kromatografija, so ciljne proteine, ki vsebujejo 3X FLAG PEPTIDE oznake, očistili iz celotnega ekstrakta. To običajno vključuje vezavo protiteles proti FLAG na beljakovine, ki vsebujejo 3X FLAG PEPTIDE, in njihovo ločevanje s kolonami za afinitetno kromatografijo ali magnetnimi kroglicami.
6. Prepoznajte beljakovine:
Očiščen protein je bil identificiran in kvantificiran z elektroforezo v gelu SDS-PAGE, imunoblotingom, masno spektrometrijo in drugimi tehnologijami, da se zagotovi njegova čistost in celovitost.
Neželeni učinki
V biomedicinskih raziskavah in poskusih, povezanih z beljakovinami, imajo označevalni peptidi ključno vlogo. Raziskovalcem lahko pomagajo pri čiščenju, odkrivanju in lociranju ciljnih beljakovin, kar močno spodbuja razvoj znanosti o beljakovinah.3XFLAG peptidje pogost in široko uporabljen označevalni peptid, sestavljen iz treh ponavljajočih se zaporedij označevalcev FLAG. Oznako FLAG so prvotno oblikovali Hopp et al. leta 1988, kasneje pa se je razvil v različice, kot je 3XFLAG, ki imajo visoko afiniteto in specifičnost ter se lahko vežejo na specifična protitelesa, kar olajša kasnejšo izolacijo in identifikacijo. Čeprav je 3XFLAG prinesel številne ugodnosti pri poskusih, lahko tako kot drugi biološki agensi povzroči tudi nekatere neželene reakcije.
Imunsko povezani neželeni učinki
Imunogenost
Imunogenost se nanaša na sposobnost snovi, da spodbudi imunski sistem telesa, da proizvede imunski odziv. 3XFLAG, kot eksogeni peptidni segment, lahko imunski sistem telesa prepozna kot "ne-lastno" komponento in tako sproži imunski odziv. Čeprav je zaporedje 3XFLAG razmeroma kratko, lahko v nekaterih primerih še vedno aktivira celice B in T, kar vodi do proizvodnje protiteles. Ta protitelesa se ne vežejo samo na prosti 3XFLAG, ampak lahko tudi prepoznajo in se vežejo na fuzijske proteine, ki izražajo oznako 3XFLAG, kar vpliva na normalno delovanje in porazdelitev fuzijskega proteina.
Alergijske reakcije
Alergijska reakcija je nenormalen imunski odziv, ki ga povzroči prekomerna občutljivost imunskega sistema na določene alergene. Posamezni posamezniki lahko doživijo alergijske reakcije pri uporabi 3XFLAG za poskuse ali zdravljenje. Resnost simptomov alergijskih reakcij je različna. Blagi primeri se lahko kažejo z lokalnimi simptomi, kot so srbenje, izpuščaj in eritem, hudi primeri pa lahko sprožijo sistemske alergijske reakcije, kot je anafilaktični šok, za katerega so značilni močan padec krvnega tlaka, težave z dihanjem in izguba zavesti, kar resno ogroža varnost življenja.
Alergijske reakcije
Mehanizem alergijskih reakcij je v glavnem povezan s protitelesi IgE v imunskem sistemu. Ko telo prvič pride v stik s 3XFLAG, ga imunski sistem prepozna kot alergen in spodbudi celice B, da proizvedejo specifična protitelesa IgE. Ta protitelesa IgE se pritrdijo na površino mastocitov in eozinofilcev. Ko telo ponovno pride v stik s 3XFLAG, se ta veže na protitelesa IgE na celični površini, kar sproži mastocite in eozinofilce, da sproščajo bioaktivne mediatorje, kot so histamin in levkotrieni, kar povzroči pojav alergijskih simptomov.
Tveganje za avtoimunske bolezni
Dolgotrajna ali ponavljajoča se izpostavljenost 3XFLAG lahko poveča tveganje za razvoj avtoimunskih bolezni. Avtoimunske bolezni se nanašajo na vrsto bolezni, pri kateri imunski sistem telesa pomotoma napade lastna tkiva in organe, kar povzroči poškodbo tkiva in funkcionalno okvaro. 3XFLAG lahko spodbudi imunski sistem, da proizvede navzkrižno reaktivna protitelesa in celice T prek mehanizma molekularne simulacije, kjer je njegovo aminokislinsko zaporedje podobno zaporedju določenih proteinov v samem telesu.
Te imunske celice in protitelesa ne le napadajo tujek 3XFLAG, ampak tudi nenamerno poškodujejo normalna tkiva telesa, kar vodi v avtoimunske bolezni. Na primer, nekatere avtoimunske bolezni, kot sta sistemski eritematozni lupus in revmatoidni artritis, so lahko povezane z avtoimunskimi reakcijami, ki jih povzročajo eksogene snovi. Čeprav trenutno ni jasnih dokazov, ki bi kazali, da 3XFLAG neposredno povzroča avtoimunske bolezni, tega potencialnega tveganja ni mogoče prezreti.
Vpliv na delovanje celic
V nekaterih eksperimentalnih študijah je bilo ugotovljeno, da imajo lahko visoke koncentracije 3XFLAG toksične učinke na celice. Manifestacije citotoksičnosti vključujejo spremembe v morfologiji celic, motnje celovitosti celične membrane, spremembe znotrajcelične encimske aktivnosti in zaviranje celične proliferacije. Njegov mehanizem delovanja je lahko povezan z interakcijo med 3XFLAG in celično membrano. Zaradi močnega negativnega naboja 3XFLAG,
lahko se z elektrostatičnimi interakcijami veže na pozitivno nabite komponente na celični membrani, s čimer spremeni prepustnost in fluidnost celične membrane, kar povzroči uhajanje znotrajceličnih snovi ali vnos škodljivih snovi od zunaj, s čimer vpliva na normalne fiziološke funkcije celice. Poleg tega lahko 3XFLAG vstopi tudi v notranjost celic, moti signalne poti, sintezo beljakovin in druge procese, kar še poslabša poškodbe celic.
Učinki na celične signalne poti
3XFLAG lahko moti znotrajcelične signalne poti in vpliva na normalno fiziološko aktivnost celic. Celična signalna pot je skupni izraz za vrsto molekularnih dogodkov, v katerih se celice odzivajo na zunanje dražljaje, uravnavajo pomembne procese, kot so celična rast, diferenciacija in apoptoza. 3XFLAG lahko moti normalen prenos signalnih poti z interakcijo s ključnimi molekulami v signalni poti, spreminjanjem aktivnosti ali ravni izražanja signalnih molekul.
Na primer, lahko se veže na receptorje na celični površini, kompetitivno zavira vezavo naravnih ligandov na receptorje in blokira prenos signala; Druga možnost je, da lahko vstopi v celico in se veže na proteine za transdukcijo signala, kar vpliva na fosforilacijo, defosforilacijo in druge modifikacijske procese beljakovin ter moti prenos in pomnoževanje signala. Ta motnja v celičnih signalnih poteh lahko povzroči celično disfunkcijo, ki vpliva na procese, kot so celična proliferacija, diferenciacija in apoptoza, kar ima lahko škodljive učinke na normalen razvoj in delovanje tkiv in organov.
Učinki na celični metabolizem
Celični metabolizem je splošen izraz za vrsto kemičnih reakcij, ki se odvijajo v celicah in zagotavljajo energijo in materialno osnovo za celične življenjske dejavnosti. 3XFLAG lahko vpliva na celične presnovne procese, moti celično proizvodnjo energije in sintezo snovi. Lahko na primer vpliva na delovanje mitohondrijev, ki so glavna mesta za aerobno dihanje in proizvodnjo energije v celicah. 3XFLAG lahko spremeni prepustnost in potencial mitohondrijske membrane z interakcijo z beljakovinami ali lipidi na membrani, kar vpliva na delovanje mitohondrijske dihalne verige in sintezo ATP,
kar povzroči nezadostno oskrbo celic z energijo. poleg tega3XFLAG peptidlahko tudi moti znotrajcelične procese, kot sta presnova glukoze in lipidov, vpliva na ravnovesje sinteze in razgradnje snovi v celicah ter negativno vpliva na normalne fiziološke funkcije celic
Pogosto zastavljena vprašanja
Kaj je 3X ZASTAVA?
+
-
Peptid 3X FLAG je sintetični peptid iz 23 aminokislinskih ostankov. Motiv Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp se v peptidu trikrat ponovi. Osem aminokislin na koncu C-sestavlja klasično zaporedje FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Kakšna je razlika med flag-tag in 3xflag?
+
-
Flag-tag je eno samo zaporedje 8 aminokislin, ki se pogosto uporablja pri aplikacijah imunoprecipitacije, western blota in imunofluorescence. Nasprotno pa 3x Flag-tag vsebuje 22 aminokislin, kar mu daje večjo afiniteto za anti-Flag protitelesa, zaradi česar je še posebej ugoden za delovne poteke čiščenja beljakovin.
Kako raztopiti 3X FLAG?
+
-
Za pripravo osnovne raztopine raztopite v TBS (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, s 150 mM NaCl) pri koncentraciji 5 mg/mL. Alikvotirajte in shranite pri –20 stopinjah. Ponavljajoče zamrzovanje in odmrzovanje ni priporočljivo.
Priljubljena oznake: 3xflag peptid cas 402750-12-3, dobavitelji, proizvajalci, tovarna, veleprodaja, nakup, cena, v razsutem stanju, naprodaj