Mellitin CAS 20449-79-0

Habermant je poročal, da lahko 1 μmol/l peptida čebeljega strupa prepreči proliferacijo tumorskih celic, vendar ne zavira rasti in stopnje kloniranja normalnih celic.

Vlasak idr. uporabil reverzno transkripcijo mRNA-DNA za izdelavo knjižnice cDNA žleze čebeljega strupa z uporabo plazmida pBR322. Izolirali so cDNA melittina iz te knjižnice z uporabo celotne mRNA žleze čebeljega strupa kot sonde in jo nadalje klonirali na plazmid pUC18 za analizo zaporedja DNA. Predvideno zaporedje melittina iz rezultatov analize zaporedja DNK je bilo identično dejansko izmerjenemu.

Zhang Qingwen je začel ekstrahirati RNK iz žleze čebeljega strupa za prevajanje v jajčeca bombaževega črva, uspešno sintetiziral promelitin in preučeval ekstrahirane komponente mRNA. Rezultati so pokazali, da je mRNA melitina visoke-čistosti mogoče dobiti z odstranitvijo rRNA iz celotne RNA.

Arora je primerjala zmožnost protihipoksične poškodbe normalnih podganjih jetrnih celic s podganjimi rakavimi celicami in potrdila, da lahko z melitinom aktivirana fosfolipaza A2 (PLA2) zmanjša odpornost rakavih celic jeter na hipoksijo. DUnn et al. je spojil protitelesni gen SCFV, pridobljen iz mišjih antičloveških celic mieloma in proteinov, specifičnih za površino celic limfoma, s peptidnim genom čebeljega strupa, da bi konstruiral anti-toksinski gen, ki lahko ubije tumorske celice. Zliti gen je bil izražen v E. coli in prečiščeni anti-toksin je pokazal svojo učinkovitost pri ubijanju tumorskih celic in vitro. Kindas et al. ekstrahirali celotno mRNA iz strupenih žlez čebele matice in ugotovili, da mRNA melittina vsebuje približno 400 baznih parov in kratek poliA rep. [9] Haasejevi poskusi so pokazali, da lahko melitin aktivira celične lipaze, vključno s fosfolipazo C (PLC), fosfolipazo D (PLD), fosfolipazo A2 (PLA2) in trigliceridi.

Li Jizhou et al. sintetiziral peptidni gen čebeljega strupa z reverzno transkripcijo mRNA cDNA, z uporabo λ GT11 vzpostavil knjižnico cDNA peptida čebeljega strupa in pregledal pozitivne klone, ki izražajo hemolitični peptid čebeljega strupa z uporabo protitelesnih sond. Benachir et al. uporabil kalcein kot fluorescentni marker za sistematično preučevanje puščanja membrane, ki ga povzroča melitin. Domneva se, da je vez medMellitinin veziklov je zelo hitro in pod delovanjem melittina nekateri vezikli sprostijo vso svojo vsebino, drugi pa ostanejo nedotaknjeni. Razmerje sproščanja vsebine je povezano z molskim razmerjem melitin/lipidi. Natančneje, melitin lahko razlikuje med nepoškodovanimi in že eksudiranimi vezikli in kaže, da ima prisotnost negativnih nabojev na površini fosfolipidnega dvosloja zaviralni učinek na litično sposobnost melitina, ki je sorazmerna z gostoto negativnih nabojev.

Kubo et al. primerjali melitin z glavnimi alkalnimi proteini eozinofilcev z uporabo petih citotoksičnih testnih metod. Rezultati so potrdili, da se melitin lahko vstavi v celično membrano celic K562 in oblikuje pore, kar povzroči dotok Ca2+, povečanje znotrajcelične koncentracije Ca2+ in celično lizo. V 1 uri melitin uniči vse eksperimentalne celice levkemije. Shamsher et al. ugotovili, da lahko melitin aktivira fosfolipazo D in nato lizira celice človeške monocitne levkemije (U937).

Wang Guanlin idr. ekstrahirali celotno RNA iz žlez čebeljega strupa in pomnožili cDNA prekurzorskega proteina melitina z RT-PCR. Nadalje so uvedli mesta cepitve amina pred zaporedjem melittina s ciljno mutagenezo in skonstruirali zaporedje, ki je bilo povezano z melittinom - Ekspresijski vektor peptidno mutiranega proteina čebeljega strupa, spojen z delnim zaporedjem galaktozidaze, rezultati analize zaporedja pa so pokazali, da so uspešno uvedli ciljni kodon in bili povezani z - Delno zaporedje galaktozidaze tvori pravilen bralni okvir in izraža mutageni protein v Escherichia coli.

Huang Xueqiang et al. opazili proapoptotični učinek melitina na človeške levkemične celice in ugotovili, da je bil učinek 5 mg/ml melitina na levkemične celice 4 ure drugačen od učinka 4 ur μ Tipične apoptotične lastnosti so opazili po 24 urah zdravljenja z g/ml peptida čebeljega strupa. Nadaljnji poskusi so pokazali, da je njegova indukcija celične apoptoze pomembno povezana z zmanjšanjem izražanja gena bcl-2. Wang Qiubo et al. z umetno sintezo sintetiziral dva oligonukleotidna fragmenta AB, ki vsebujeta specifična mesta cepitve, in pod delovanjem encima Klenow oblikoval ciljni gen. Uporabili so restrikcijski endonukleazi Hind III in Xmn I, da sočasno razcepili ciljni gen in plazmid ekspresijskega vektorja Pmal-p2 ter skonstruirali rekombinant obeh pod delovanjem T4 ligaze - Za identifikacijo pomožnih klonov so uporabili komplementarni pregled in izvedli specifično encimsko razgradnjo in analizo zaporedja, da so dobili prokariontske ekspresijske klone rekombinantni peptid čebeljega strupa.

Liu Ling et al. je izvedlo študijo na treh celičnih linijah raka jeter, SMMC-7721, BEL-7402 in Hep-3B, z uporabo metode MTT za raziskovanje razmerja med odmerkom in odzivom melittina pri zaviranju tumorjev. Rezultati so pokazali, da se zaviralni učinek melitina na tumorje giblje od 8 do 64 μ. Pri odmerku g/ml stopnja zaviranja tumorja melitina narašča linearno in kaže pomembne protitumorske učinke in vitro. Na podlagi te špekulacije je lahko povezana s samoagregacijo melittina pri visokih koncentracijah. V visokih koncentracijah se večinoma pojavlja v tetramernem stanju, ki se bolj učinkovito veže na celično membrano v primerjavi z monomeri, s čimer tvori ionske kanalčke, spremeni prepustnost membrane, razpoka celično membrano in izkazuje močan in vitro protitumorski učinek.

Li Bai, Zhang Chen in drugi so z raziskavami genskega inženiringa dokazali, da ima melitin učinek induciranja apoptoze tumorskih celic. Po transfekciji z rekombinantnim adenovirusom, ki nosi gen za melitin, so nekatere rakave celice jeter pokazale morfološke spremembe, kot so apoptotična morfologija, zmanjšan volumen, okroglost in agregacija robov kromatina pod invertno fazno kontrastno mikroskopijo. Rekombinantni adenovirus, ki nosi gen za melitin, lahko učinkovito inducira apoptozo v rakavih celicah jeter, s stopnjo apoptoze približno 20 %, kar je višje od kontrolne skupine brez rekombinantnega adenovirusa in netransfektiranega rekombinantnega adenovirusa. To nakazuje, da je indukcija apoptoze tumorskih celic tudi eden od mehanizmov, s katerimi deluje genska terapija z melittinom.

Zhao Yahua in drugi so namenoma spremenili primarno strukturno zaporedje aminokislin v melittinu in izraženoMellitingena s poskusi. Poskusite čim bolj zmanjšati medsebojno delovanje med melittinom in bakterijskimi možganskimi ovojnicami, predvsem z invazijo membrane na način preproge, ki povzroči sterilizacijo. Hkrati se zaradi sprememb v številu nabojev in molekularne konformacije močno zmanjša verjetnost njegove amfifilne interakcije z membrano krvnih celic, s čimer se doseže cilj inhibicije hemolize. Hemoliza modificiranega čebeljega strupa se je bistveno zmanjšala v primerjavi z aktivnostjo hemolize standardnega vzorca, za približno 14,3-krat.

11. avgusta 2009 je britanski Daily Mail poročal, da so znanstveniki z Univerze v Washingtonu v Združenih državah objavili rezultat raziskave - z uporabo nanotehnologije so razvili "nano čebelo", ki jo je mogoče videti samo pod mikroskopom. "Čebele" lahko prodrejo v rakave celice, sprostijo peptide čebeljega strupa in odstranijo rakave celice eno za drugo. Mala čebela ima v sebi tudi specializirane pozicionirne snovi, ki jo lahko vodijo na poti in neposredno dosežejo prizadeto mesto. V poskusu je "nano čebela" zmanjšala število rakavih celic pri miših z rakom dojke za 45%, medtem ko se je število rakavih celic pri miših s kožnim rakom zmanjšalo za 75%.